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染色凋亡试剂盒使用过程

发布时间:2021-05-06浏览:95次

  染色凋亡试剂盒贴壁细胞:
  A.取洁净盖玻片在70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间,无菌超净台内吹干或用无菌的PBS或0.9%NaCl等溶液洗涤三遍,再用细胞培养液洗涤一遍。将盖玻片置于六孔板内,种入细胞培养过夜,使约为50%-80%满。
  B.刺激细胞发生凋亡后,吸尽培养液,加入0.5ml固定液,固定10分钟或更长时间(可4℃过夜)。
  C.去固定液,用PBS或0.9%NaCl洗两遍,每次3分钟,吸尽液体。洗涤时宜用摇床,或手动晃动。
  D.加入0.5ml Hoechst33258染色液,染色5分钟。也宜用摇床,或手动晃动数次。
  E.去染色液,用PBS或0.9%NaC1洗两遍,每次3分钟,吸尽液体。洗涤时宜用摇床,或手动晃动。
  F.滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上,盖上贴有细胞的盖玻片,让细胞接触封片液,尽量避免气泡。
  G.荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。激发波长350nm左右,发射波长460mm左右。
  染色凋亡试剂盒悬浮细胞:
  A.离心收集细胞样品于1.5ml离心管内,加入0.5ml固定液,缓缓悬起细胞,固定10分钟或更长时间(可4℃过夜)。
  B.离心去固定液,用PBS或0.9%NaCl洗两遍,每次3分钟。洗涤期间手动晃动数次。
  C.离心后吸去大部分液体保留约50ul液体,再缓缓悬起细胞,滴加至载玻片上,尽量使细胞分布均匀。
  D.稍晾干,使细胞贴在载玻片上不易随液体流动。
  E.均匀滴上0.5ml Hoechst33258染色液,染色5分钟。用吸水纸从边缘吸去液体,微晾干。
  F.去染色液,用PBS或0.9%NaCl洗两遍,每次3分钟,吸尽液体。洗涤时宜用摇床,或手动晃动。
  G滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上,盖上一洁净的盖玻片,尽量避免气泡。
  H.荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。激发波长350nm左右,发射波长460mm左右。

 

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