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raw264.7细胞培养经验分享

发布时间:2021-09-09浏览:360次

  raw264.7细胞源自Abelson鼠科白血病病毒诱导的肿瘤。sIg-,Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原阴性。此细胞株不分泌可检测到的病毒颗粒,XC斑点形成试验阴性。可以胞饮中性红并吞噬乳胶颗粒与酵母聚糖。可以抗体依赖性地分解绵羊红血球与肿瘤靶细胞。LPS或PPD处理2天可诱导分解红血球但对肿瘤靶细胞无作用。
  raw264.7细胞培养经验:
  1.基本情况:小鼠来源白血病毒诱导肿瘤细胞,属于巨噬细胞,贴壁生长。下图是ATCC来源。主流观点是以椭圆圆形细胞为主,激活分化后才有触角。
  形态以类圆形和不规则为主,一般1--2个核,极少数有3个核,胞浆伸展时胞体较大。镜下细胞为小珍珠似的圆形椭圆形。
  2.培养情况
  培养条件:10%FBS+高糖DMEN,进口gibco血清更好
  传代:细胞增殖较快,70%即可传代,细胞有触角也提示需要传代,1:3----1:6传代,推荐使用皿。传代时切记不要使用胰酶,正常情况下此细胞贴壁不牢,直接吹打即可,胰酶消化会使细胞伸出触角改变形态。我是直接用培养基吹打,也可以用PBS,感觉无差异。这个细胞增殖较快,培养基消耗快容易变黄,要勤换液。
  冻存和复苏:和普通细胞无异。
  raw264.7细胞作为巨噬细胞有很强的吞噬能力,吞噬抗原后伸出长角,就是大家常见的伪足。同时贴壁黏附能力增强,传代时难以消化下来。该细胞贴壁时间短,成片生长,似小菌落般小片生长,连成一片并会叠层。传代密度不易过高或者过低,过低会导致细胞生长缓慢甚至不生长,过高,细胞会长出伪足。
  3.关于RAW264.7分化,正常细胞为贴壁不牢的圆形椭圆形细胞,分化后伸出伪足,贴壁能力增强。
  避免方法:
  1,血清建议采用进口的真血清,
  2,密度不要太高或者太低,传代时切不可拖延时间,
  3,传代时切不可胰酶消化,直接吹打就能下来,
  4,不要污染,包括其他细胞株的污染。

 

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