游离脂肪酸对非洲绿猴肾细胞凋亡的影响

　　非洲绿猴肾细胞被成功的用来培养狂犬病疫苗、乙脑疫苗等多种疫苗，在非典期间又为研究冠状病毒做出贡献，在医药研究种广泛应用。

　　非洲绿猴肾细胞探讨脂肪酸对细胞生长的影响。利用不同种类不同浓度脂肪酸处理体外培养细胞，利用光镜观察细胞形态，后经Hoechst/PI荧光染色和染色体DNA梯度电泳观察细胞形态改变并确定细胞凋亡；同时应用蛋白免疫印迹反应检测淘亡相关Bc1-2、Bax、Fas、P53和Caspase-3蛋白质表达水平。实验结果：

　　（1）光镜观察显示：细胞经脂肪酸处理后有形态上的改变，细胞产生不同程度的破损，这种损坏程度随脂肪酸浓度递增而加强。

　　（2）Hoechst/Pl染色表明：饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸都可剂量依赖性的引起Vero细胞凋亡。随浓度升高，PI着色加深，染色质边集；Hoechst着色渐淡。

　　（3）DNA凝胶电泳显示：经脂肪酸处理的细胞DNA呈明显的梯度分子条带，表现为典型的凋亡现象，此现象随处理浓度加大而加重。

　　（4）Western-blot分析结果表明：脂肪酸处理的细胞中，Bcl-2、Bax、Fas、Caspase-3蛋白表达量发生改变，其中Bax、Fas蛋白表达量随浓度增加而显著上调，同时，Bc1-2蛋白含量有所降低；另外，饱和脂肪酸处理组中P53蛋白表达并无太大差异，而不饱和脂肪酸组P53含量以剂量依赖性上升。

　　实验结果表明，随着脂肪酸浓度的升高，Vero细胞的凋亡程度有所增加，有明显凋亡现象。由于Bcl-2、Bax、Fas、Caspase-3和P53蛋白表达发生变化，提示，这些相关基因在脂肪酸诱导的Vero细胞凋亡过程中起到了重要的作用。