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原代细胞复苏的基本操作方法

发布时间:2021-10-19浏览:131次

  原代细胞复苏实验准备:
 
  (1)仪器:净化工作台、离心机、恒温水浴箱、倒置相差显微镜、培养箱、液氮冰箱
 
  (2)玻璃器皿:吸管(弯头、直头)、培养瓶、玻璃瓶(250ml、100ml)、废液缸
 
  (3)塑料器皿:吸头、枪头、胶塞、移液管(10ml)、15ml离心管、冻存管(1~2ml)
 
  (4)其他物品:微量加样枪、红血球计数板、记号笔、医用橡皮膏、移液枪
 
  (5)试剂:PBS、小牛血清、培养液、双抗(青霉素、链霉素)、胰蛋白酶(0.08%)
 
  原代细胞复苏操作步骤:
 
  (1)从液氮容器中取出冻存管,直接浸入37℃温水中,并不时摇动令其尽快融化。
 
  (2)从37℃水浴中取出冻存管,75%酒精消毒后,打开盖子,用吸管吸出细胞悬液,加到离心管中。PriCells推荐接种培养瓶,37℃培养箱静置培养。
 
  (3)离心,1000rpm,5min。PriCells推荐不离心。
 
  (4)弃去上清液,加入含10%小牛血清培养液重悬细胞,计数,调整细胞密度,接种培养瓶,37℃培养箱静置培养。PriCells推荐小牛血清浓度依据原代细胞种类。
 
  (5)次日更换一次1/2培养液,继续培养。
 
  注意事项:
 
  (1)将冻存管从液氮容器中取出时,要做好防护工作,以免冻伤。
 
  (2)取出冻存管后立即放入水浴中,使其尽快融化(在1-2分钟内)。
 
  (3)复苏好用新配制的培养液。

 

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