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人正常肝细胞培养步骤

发布时间:2021-11-04浏览:88次

  我们现在所知道的地球上的生命,人类、动物、植物,还有肉眼看不见的微观世界,这些林林总总的生命体都是由细胞所组成的。所以,生命体如何繁衍、变化、进化,组成纷繁复杂的大千世界,全都是依靠这些细胞在工作。细胞也有各式各样不同的分类,其中有一类细胞它很特殊,而且拥有其他细胞不具有的一项重要功能——不断繁衍、自我复制、自我更新。这类细胞就是干细胞。
  人正常肝细胞培养步骤:
  1)培养基及培养冻存条件准备:
  1.准备培养基;
  2.培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%;
  3.冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
  2)细胞处理:
  复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加l-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入lOcm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。细胞传代:如果细胞密度达80%-90%即可进行传代培养。
  对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2ml消化液于培养瓶中,置于37°C培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加l-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

 

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