人红白血病细胞培养及冻存操作

　　人红白血病细胞培养操作：
 

　　1.换液周期2-3天；
 

　　2.培养基体积T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml；
 

　　3.传代比例1:2-1:4(具体情况视细胞生长速度及密度决定)；
 

　　4.传代方法1.混匀细胞，收集细胞培养基，900rpm离心3-5min，弃上清；
 

　　5.加新的*培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里；
 

　　6.补足*培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养。
 

　　注意事项：悬浮细胞会附着瓶底，轻轻晃动培养基或者吹打细胞面就会脱落，不需要胰酶消化。建议使用培养皿培养，更适合吹打细胞操作，吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免影响细胞状态。
 

　　人红白血病细胞冻存操作：
 

　　1.冻存液配方92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%*培养基+8%DMSO(高手推荐);
 

　　2.冻存规格200-300万/ml，1ml每管。
 

　　冻存方法：
 

　　1.消化并离心获得细胞沉淀后，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞；
 

　　2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管；
 

　　3.将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存。
 

　　注意事项：冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案。