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人红白血病细胞培养及冻存操作

发布时间:2021-11-09浏览:75次

  人红白血病细胞培养操作:
 
  1.换液周期2-3天;
 
  2.培养基体积T25瓶10-12ml;10cm皿12-15ml;
 
  3.传代比例1:2-1:4(具体情况视细胞生长速度及密度决定);
 
  4.传代方法1.混匀细胞,收集细胞培养基,900rpm离心3-5min,弃上清;
 
  5.加新的完全培养基轻轻重悬细胞,均匀分到新的培养瓶里;
 
  6.补足完全培养基,将培养瓶放回培养箱静置培养。
 
  注意事项:悬浮细胞会附着瓶底,轻轻晃动培养基或者吹打细胞面就会脱落,不需要胰酶消化。建议使用培养皿培养,更适合吹打细胞操作,吹打细胞注意尽量轻柔,不要产生过多气泡以免影响细胞状态。
 
  人红白血病细胞冻存操作:
 
  1.冻存液配方92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐);
 
  2.冻存规格200-300万/ml,1ml每管。
 
  冻存方法:
 
  1.消化并离心获得细胞沉淀后,加配置好的冻存液轻轻重悬细胞;
 
  2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管;
 
  3.将冻存管转入程序冻存盒,放入-80度冰箱过夜,第二天转入液氮保存;没有程序冻存盒的实验室,加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min,再-20度静置2h后转入-80度过夜,第二天转入液氮保存。
 
  注意事项:冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性,若有异常,及时调整实验方案。

 

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