293细胞正确的培养步骤

　　293细胞被用于腺病毒载体的繁殖。利用病毒进化目标基因并将其转移到细胞中是一种有效的方法。然而，由于病毒作为病原体的特性，它们也会带来风险。因此，为了繁殖这种病毒载体，需要一种能够表达缺失基因的细胞系。不仅具有生成人糖基化谱和建立调控记录的能力，而且具有多种优势，是一种特别有吸引力的重组蛋白表达系统。
 

　　293细胞培养步骤：
 

　　一、复苏细胞：
 

　　将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL*培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6cm皿中)，培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
 

　　二、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 

　　a)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
 

　　1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
 

　　2.加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的*培养基终止消化。
 

　　3.轻轻吹打细胞，*脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
 

　　4.按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2的比例分到新的含5-6ml培养液的新皿中或者瓶中。
 

　　b)对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
 

　　方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。
 

　　方法二：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。