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293细胞正确的培养步骤

发布时间:2022-07-26浏览:245次

  293细胞被用于腺病毒载体的繁殖。利用病毒进化目标基因并将其转移到细胞中是一种有效的方法。然而,由于病毒作为病原体的特性,它们也会带来风险。因此,为了繁殖这种病毒载体,需要一种能够表达缺失基因的细胞系。不仅具有生成人糖基化谱和建立调控记录的能力,而且具有多种优势,是一种特别有吸引力的重组蛋白表达系统。
 
  293细胞培养步骤:
 
  一、复苏细胞:
 
  将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液,补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6cm皿中),培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
 
  二、细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
 
  a)对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
 
  1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
 
  2.加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。
 
  3.轻轻吹打细胞,完全脱落后吸出,在1000RPM条件下离心8-10分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
 
  4.按5-6ml/瓶补加培养液,将细胞悬液按1:2的比例分到新的含5-6ml培养液的新皿中或者瓶中。
 
  b)对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
 
  方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心8-10分钟,弃上清液,补加1-2ml培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。
 
  方法二:可选择半数换液方式,弃半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。

 

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