动物细胞分离培养是用无菌操作的方法将动物体内的组织(或器官)取出,模拟动物体内的生理条件,在体外进行培养,人们借以观察细胞的生长、增殖和细胞分化以及细胞凋亡或死亡的过程。因为分离的细胞没有免疫防御系统,所以动物细胞分离操作需要比外科手术更加严格的无菌操作,无菌操作的原则就是保证细胞分离过程中的操作环境,使用的器械、耗材以及试剂无菌。
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仪器:超净工作台、离心机、倒置显微镜、培养箱、冰箱、高压蒸汽消毒装置、移液器。
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器械:止血钳、手术刀、眼科剪、手术剪、镊子、细胞过滤筛等。所有器械清洗完以后,使用棉布包裹,捆好后湿热灭菌。
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耗材:培养皿、培养瓶、离心管(15 mL和50 mL)、巴氏吸管(或玻璃吸管)、移液管、烧杯。如果购买的是无菌包装的一次性耗材可以直接使用,如果是玻璃材质的用品,建议使用高压蒸汽灭菌。
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试剂:75%的酒精和碘酒、0.9%的生理盐水、DBSS、胰蛋白酶、 DMEM(或PRMI-1640液体培养基、抗血凝剂、血清、二甲基亚砜(DMSO)。所使用的液体溶剂大部分使用过滤除菌的方式保证无菌。培养基在使用前先在37℃水浴中升温。酶储液放置于-20 ℃,稀释以后放在4℃中保存,因胰蛋白酶在37℃中降解比较快,所以不建议酶升温至37℃再使用,可以直接从4℃中取出用完后尽快放回冰箱。因为动物组织比较珍贵,建议试剂在使用前先测试是否染菌。
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其他:冰块、脱脂棉球、封口膜、记号笔。
实/验/室/的/清/洁
【SNB-001】PBS(Phosphate Buffer Saline) 磷酸盐缓冲液 1x
【SNT-002】0.25%胰酶(含EDTA)
【SNM-002E】DMEM高糖*培养基(含10%血清,双抗)
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