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动物细胞分离培养准备工作

发布时间:2022-08-19浏览:124次

动物细胞分离培养是用无菌操作的方法将动物体内的组织(或器官)取出,模拟动物体内的生理条件,在体外进行培养,人们借以观察细胞的生长、增殖和细胞分化以及细胞凋亡或死亡的过程。因为分离的细胞没有免疫防御系统,所以动物细胞分离操作需要比外科手术更加严格的无菌操作,无菌操作的原则就是保证细胞分离过程中的操作环境,使用的器械、耗材以及试剂无菌。


硬/件/准/备




01

仪器:超净工作台、离心机、倒置显微镜、培养箱、冰箱、高压蒸汽消毒装置、移液器。

02

器械:止血钳、手术刀、眼科剪、手术剪、镊子、细胞过滤筛等。所有器械清洗完以后,使用棉布包裹,捆好后湿热灭菌。

03

耗材:培养皿、培养瓶、离心管(15 mL和50 mL)、巴氏吸管(或玻璃吸管)、移液管、烧杯。如果购买的是无菌包装的一次性耗材可以直接使用,如果是玻璃材质的用品,建议使用高压蒸汽灭菌。

04

试剂:75%的酒精和碘酒、0.9%的生理盐水、DBSS、胰蛋白酶、 DMEM(或PRMI-1640液体培养基、抗血凝剂、血清、二甲基亚砜(DMSO)。所使用的液体溶剂大部分使用过滤除菌的方式保证无菌。培养基在使用前先在37℃水浴中升温。酶储液放置于-20 ℃,稀释以后放在4℃中保存,因胰蛋白酶在37℃中降解比较快,所以不建议酶升温至37℃再使用,可以直接从4℃中取出用完后尽快放回冰箱。因为动物组织比较珍贵,建议试剂在使用前先测试是否染菌。

05

其他:冰块、脱脂棉球、封口膜、记号笔。




实/验/室/的/清/洁

实验室一般采用照射或者熏蒸的方法消毒。熏蒸常使用过氧乙酸蒸气进行熏蒸,再通过使用紫外照射的方法灭菌。实验室在使用前半个小时打开紫外灯照射,虽然照射也可以对操作桌面灭菌,但因为紫外线容易被桌面上放置的物品挡住,导致桌面的灭菌受到影响,所以如有需要可以在使用前先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等,然后用3%来苏尔或0.1%新洁尔灭或0.5%过氧乙酸擦拭。紫外照射的时候也可以预先将实验中用到的物品放到实验台的边缘,进一步降低实验中可能存在的污染风险,照射前检查实验中所需要的物品是否已经准备妥当(如检查酒精灯中的酒精量是否可以保证实验的完成),避免实验进行中因为缺少试剂或器械而导致实验被迫终止。


实验人员无菌操作前需要用肥皂清洗双手及手臂,用清水冲干净,穿好灭菌工作服,戴好口罩和帽子,进行操作前用75%的酒精擦洗双手,如戴乳胶手套,乳胶手套也要擦拭75%的酒精。可以将消毒用的酒精装到一个喷壶里面,这样保证酒精喷洒均匀;也可以将脱脂棉球放到装有酒精的广口瓶中,使用时用镊子取出棉球擦拭手和乳胶手套。

在超净台里面进行无菌操作时,所使用的试剂和器材在使用前应用火焰灼烧,如培养瓶的打开和拧紧的操作,一般使用酒精灯火焰灼烧。一般使用的金属器械不能进行长时间灼烧,避免损伤器械,导致生锈;金属器械要等到冷却以后再取动物组织。吸取过培养基和血清的耗材不能在火焰上加热太长时间,避免其中的蛋白等物质受热产生有害物质,从而影响细胞的生长。

产/品/推/荐






无菌、活性、高效

【SNB-001】PBS(Phosphate Buffer Saline) 磷酸盐缓冲液 1x

【SNT-002】0.25%胰酶(含EDTA)

【SNM-002E】DMEM高糖完全培养基(含10%血清,双抗)




公司简介


武汉尚恩生物技术有限公司坐落于武汉东湖高新区光谷生物城,专注于细胞及系列产品的研发、生产和服务,公司建有标准化GMP实验室、动物房,已整体通过ISO 9001:2015质量管理体系认证,获得高新技术企业、3551人才、瞪羚企业、科技小巨人等多项荣誉。  


公司主要研发生产细胞系、原代细胞、胎牛血清、基础培养基、完全培养基、辅助试剂等系列产品,提供细胞及培养配套产品一站式采购;细胞库冻存细胞系500余种,同时通过不间断引种细胞扩大丰富细胞种类;公司还提供人源细胞系的STR鉴定、大小鼠的种属鉴定服务等。  


公司细胞业务覆盖国内各大高校生物实验室、生物研究机构及一些生物科研、诊断、制药公司,不断为广大科研工作者提供优质的产品和服务!尚恩生物—您专业的细胞供应商!





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