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动物细胞培养基的6大物理特性

发布时间:2022-11-11浏览:103次





01
.pH

多数细胞系在pH7.4下生长得很好,尽管如此各细胞株之间,细胞生长pH值还是会有一定差异。一些正常的成纤维细胞系在pH 7.4~7.7生长较,而一些转化细胞系在pH 7.0~7.4更合适。据报道,上皮细胞可在pH 5.5维持。为确定较pH值,建议做一个简单的生长实验或特殊功能分析。

 

酚红常用作pH指示剂。pH 7.4呈红色,pH 7.0变橙色, pH6.5变黄色, pH 7.6红色中略带蓝色,pH 7.8呈紫色。


02
.缓冲

细胞培养基要在两种条件下有一定的缓冲作用:一是开放式培养条件下,CO2的释放引起pH升高;二是细胞在高密度下,转化细胞系大量产生CO2和乳酸,引起pH下降。为了稳定pH值,可以加入缓冲物。

 

尽管碳酸氢钠缓冲系统在生理pH下的缓冲能力差,但由于它毒性小,成本低,对培养物有营养作用,所以它仍比其他缓冲系统使用得多。HEPES在pH 7.2~7.6缓冲作用比其他缓冲系统强很多,现在广泛采用的浓度是10 mmol/L或20 mmol/L。


03
.渗透压

多数培养细胞对渗透压有很宽的耐受范围。人细胞浆的渗透压是约290 mOsm/kg,因而推测这是体外人细胞的较值,这与其他物种的细胞不同(如小鼠约是310 mOsm/ kg)。实际上,大多数细胞在260~320 mOsm/kg之间可行。更高的渗透压通常会使细胞生长速率减缓,但也可使蛋白产物的合成速率加快。因此,有文献报道可将细胞培养基渗秀压提高到360 mOsm/kg,以提高单克隆抗体产量。


04
.温度

温度除了对细胞生长有直接作用之外,也会影响pH。这是因为低温下CO2溶解度增加,缓冲剂的离子化和pKa上的变化,细胞培养基的pH值也随之发生变化。室温下应调节到比36.5 ℃下低0.2个pH单位。次配培养基时,建议将培养基加入血清,在36.5℃下和合适的气体条件下培养样品过夜,检查pH。


05
.黏度

细胞培养基的黏度主要受血清含量的影响,多数情况下,对细胞生长没有影响。但当细胞悬浮液需要搅拌时(如悬浮培养物被搅拌或者胰蛋白酶消化后解离细胞时),细胞培养基的黏度就是一个重要的影响因素。黏度大,细胞受损小。若在搅拌时细胞受到损害,可以用羧甲基纤维素、聚乙二醇或聚乙烯基吡咯烷酮增加培养基的黏度,减轻细胞损害。在低血清浓度或无血清下,这一点特别重要。


06.表面张力和泡沫

细胞培养基的表面张力可促进培养物贴附到介质上,但很少用某种方法控制它。悬浮培养时,用含5% CO2的空气在含血清培养基中鼓泡,会产生泡沫。加入硅油消泡剂降低表面张力,有助于防止泡沫生成。

 

泡沫的作用还不清楚。但泡沫会使蛋白质的变性速率增加;如果泡沫达到培养容器的颈部,也增加了污染的危险。泡沫在液面上的破碎过程是能量快速释放的过程,会造成细胞的严重伤害。细胞的轻度疏水性促使细胞在气泡上升过程中向气一液界面聚集,并随气泡上升至液面,在气泡破碎时,加重了对细胞的伤害,如果泡沫很稳定,还会造成泡沫中细胞的营养缺乏。悬浮细胞培养过程中,必须考虑气泡的作用,通常用改变通气方法或加入保护剂的方法来减少对细胞的损伤。





产/品/推/荐

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 【SNM-002E】DMEM高糖培养基(含10%血清,双抗)

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