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hela细胞进行传代培养的操作步骤

发布时间:2022-11-18浏览:357次

  hela细胞通过关闭某些信号通路(包括PI3K和MKK4/MAPK信号通路),激活某些信号通路(包括cAMP、Ca~(2+)—CaM、PKC、Ras和P38/MAPK信号通路),激活或抑制不同的信号分子,使细胞产生具有针对性的细胞效应,包括诱导表达多种特异性蛋白(酶、细胞骨架蛋白、细胞因子等)、改变代谢途径、减弱某些代谢、加强另一些代谢以及提高胞内运输能力等,使自己可以适应痢疾杆菌的侵袭而生存下去。
 
  hela细胞传代培养的操作步骤:
 
  1.观察培养基是否正常,细胞状态如何,细胞密度如何,决定是否传代。观察时拧紧盖子。
 
  2.加热PBS、versene、培养基,(提前做好)瓶子不要倒着放,不要让液体接触到瓶塞。
 
  3.打开超净台(先开风机,后开照明),用75%乙醇清洁台面,点燃酒精灯。不要把废液缸拿出去倒,如果废液太多,可以用其他容器先装废液。取小离心管一个,置于架子上。
 
  4.取尖吸管、吸量管各一支,放置在专用的架上。放置的方式,注意吸管、吸量管前端都不要与架子接触。
 
  5.取待传代的细胞。打开versene,用酒精灯外焰烧。烧吸管时距离酒精灯心远些,不要把渣滓带进去。把试剂拿入台子的时候,尽量平稳,不要让试剂碰到瓶口。
 
  6.用吸量管吸取旧的培养基,置离心管中,吸量管加入versene,然后将versene瓶收起来。(加versene主要是为了将旧培养基洗去)。在离心管中间部分将液体加入。吸液体和加液体时都不要对着细胞。
 
  7.打开胰酶,然后将versene弃掉。换新管,用尖吸管吸取适量胰酶加入。加胰酶后,尽快放平,使细胞消化时间一致。
 
  8.将细胞放入37度孵箱。放孵箱2min,收胰酶,打开PBS.之后拿出来镜下随时观察。使用二次消化法,去除容器中残余的细胞。别忘了用旧培养基中和。

 

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