143B人骨肉瘤细胞综合解析

　　143B人骨肉瘤细胞培养条件与操作规范：
 

　　1. 培养基与环境
 

　　基础培养基：DMEM或MEM，补充10%胎牛血清(FBS)、1%双抗(青霉素/链霉素)。
 

　　培养条件：37℃、5% CO₂、饱和湿度，培养箱湿度建议70%-80%。
 

　　容器适配：T25瓶(8-10mL培养基)、10cm皿(12-15mL)，根据细胞密度调整换液频率(每2-3天一次)。
 

　　2. 关键操作步骤
 

　　复苏：
 

　　37℃水浴快速解冻，离心(1000rpm，3-5min)去除冻存液。
 

　　新鲜培养基重悬后接种，次日观察细胞贴壁情况。
 

　　传代：
 

　　密度达80%-90%时，用0.25%胰酶-EDTA消化1-2分钟，显微镜下观察细胞间隙变大即终止消化。
 

　　传代比例1:2至1:4，轻柔吹打避免气泡，维持细胞活性。
 

　　冻存：
 

　　冻存液配方：90% FBS + 10% DMSO，密度0.5-1×10⁶细胞/mL。
 

　　程序降温盒-80℃过夜后转液氮，需复苏验证活性。
 

　　3. 质量控制
 

　　鉴定与检测：定期进行STR鉴定和支原体检测，确保遗传背景稳定且无污染。
 

　　状态监测：传代后镜检并拍照记录，观察细胞形态及碎片情况，及时清理死细胞。