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小鼠原代细胞的改良培养

发布时间:2021-06-16浏览:142次

  小鼠原代细胞培养技术日渐成熟,但在同样实验条件下不易获得,而小鼠基因组与人类基因组有更多相似之处,具有更高的研究价值。改进小鼠乳鼠原代心肌细胞的培养方法,得到纯度高、活力强、保持心肌细胞原有结构和功能的心肌细胞。
  方法:将小鼠心肌组织利用酶消方法分离为单个的心肌细胞,实验步骤中将经典的胰酶、胶原蛋白酶混合酶消法分解开,先用胰酶消化心肌组织,使心肌组织变得松散,再用胶原蛋白酶,作用于细胞间质的胶原纤维,使心肌组织分离为单个的小鼠原代细胞。调整胰酶和IⅡ型胶原蛋白酶的浓度和作用时间,严格控制试剂pH值和各步骤的温度。
  结果与结论:心肌细胞在接种24h后开始贴壁,48h后可观察到部分心肌细胞出现自主搏动,72h后彼此形成交联,96h后可观察到心肌细胞形成细胞簇,并出现一致性搏动。心肌细胞的存活率和纯度均达95%以上。结果证实,实验采用改良方法成功培养出小鼠原代细胞,并且保留心肌细胞的结构和功能,纯度和成活率高,是可行的培养方法。
  小鼠原代细胞之所以大力培养原因是小鼠基因组与人类基因组有更多相似之处,具有更高的研究价值。国内外学者对通过培养原代乳鼠心肌细胞,从而进一步研究心肌细胞对缺氧、缺血等相关心脏疾病的发病机制进行了大量工作。大鼠心肌细胞原代培养技术日渐成熟,但是小鼠心肌细胞在同样实验条件下不易获得。采用混合酶消化心肌细胞,而是先用胰酶消化,后用胶原蛋白酶消化的实验方法获得心肌细胞,此种操作方法可得到纯度高、活力强、保持心肌细胞原有结构和功能的心肌细胞。

 

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