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a549细胞是一种广泛使用的人肺腺癌细胞系

更新时间:2022-10-17浏览:820次

  a549细胞是一种广泛使用的人肺腺癌细胞系,来源于原发性肺肿瘤。具有高度增殖性,现已被用于各种研究应用。在自然界中,这些细胞是鳞状的,它们可以通过肺泡扩散传播一些物质,如水和电解质。如果将A549细胞体外培养,它们会成长为单层细胞,附着或紧贴在培养瓶上。人肺泡上皮细胞株A549可以固定或悬挂在体外的溶液。这些细胞的另一个特点是他们能够合成卵磷脂,并且含有高度不饱和的脂肪酸,这对于维持细胞膜磷脂有重要意义。
 
  a549细胞传代:
 
  (1)无菌操作打开培养瓶瓶盖,倒掉培养液。
 
  (2)向已经长满得细胞中加入消化液1m1,轻轻摇动培养瓶,使消化液流遍所有得细胞表面,吸弃或倒掉,轻轻冲洗细胞表面2~3遍,以尽可能去除原培养液中得牛血清。
 
  (3)加入1ml消化液,在37℃培养箱中孵育5~8min后把培养瓶放置在倒置显微镜下观察,发现细胞得胞质回缩、胞间质增大后,立即终止消化、
 
  (4)加入5ml预热至37℃得培养液,用玻璃吸管反复吹打以分散细胞、吹打过程按顺序进行,从培养瓶底部一边开始到另一边结束,以确保所有得底部都被吹到、
 
  (5)吸取一半得细胞悬液,接种到新得25cm2培养瓶中,补足培养液,并且添加10%~20%得胎牛血清。通常每瓶液体量为5~10ml。
 
  (6)倒置显微镜下观察,37℃、5%C0。培养。
 
  a549细胞的维持和培养:
 
  (1)准备一个盛有37℃温水的烧杯,从液氮罐中取出存有A549细胞的冻存管,放于37℃温水中,用镊子夹住轻轻摇动使其迅速融化。
 
  (2)1000~2000r,3~5min离心。
 
  (3)在无菌操作台中采用75%的乙醇*擦拭冻存管,然后打开冻存管,注意动作要轻柔。
 
  (4)用1ml枪头将上清液去除,加入1ml预热的细胞培养液将细胞吹散开,转移至25cm2培养瓶中。
 
  (5)补充4ml的RPMI1640培养基,并且添加10%的胎牛血清。
 
  (6)倒置显微镜下观察,37℃、5%C02培养。
 
  (7)24h后,更换新的培养液。
 
  (8)常规传代培养。

 

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