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染色凋亡试剂盒

简要描述:染色凋亡试剂盒是一种采用Hoechst 33342和碘化丙啶(Propidium Iodide ,PI )双荧光染色方法进行细胞周期与细胞坏死分析的检测试剂盒。单纯的PI染色能够观察DNA直方图上凋亡细胞的亚G1峰,但只能代表G0/G1期发生凋亡,无法观察S期和G2期发生的细胞凋亡,而且细胞经过固定后无法对活细胞和死细胞进行区分。Hoechst 33342可以穿透细胞膜,进入正常细胞和凋亡细胞与DNA结合,能在紫外线下显示蓝色荧光,而且染色后凋亡细胞荧光会比正常细胞明显增强。PI不能穿透细胞膜,对于具有完整细胞膜的正常细胞或凋亡细胞不能染色。而对于坏死细胞,其细胞膜的完整性丧失,PI可以穿透细胞膜使坏死细胞着色产生红色荧光。

  • 产品型号:Annexin V-PI
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2021-11-18
  • 访  问  量:228
详细介绍
品牌自营品牌CAS咨询客服
分子式咨询客服纯度咨询客服
分子量咨询客服货号HEK-293A
规格供货周期现货
主要用途科研实验应用领域化工,生物产业,能源

  细胞凋亡是指为维持有机体内环境稳定,由基因控制的细胞自主的有序的死亡。正常情况下任何细胞在形成过程中发生的异常都会通过凋亡消除。例如体内的癌细胞增长为肿瘤的过程会受细胞凋亡的引导而被抑制。然而在抑癌基因p53出现问题时,凋亡就不会诱导发生,从而导致癌细胞的不断增长。细胞凋亡可以通过细胞形态的变化或生物化学的变化来检测。目前常用的指标有caspase活性变化、DNA碎片、磷脂酰丝氨酸的外翻等。

  染色凋亡试剂盒是一种采用Hoechst 33342和碘化丙啶(Propidium Iodide ,PI )双荧光染色方法进行细胞周期与细胞坏死分析的检测试剂盒。单纯的PI染色能够观察DNA直方图上凋亡细胞的亚G1峰,但只能代表G0/G1期发生凋亡,无法观察S期和G2期发生的细胞凋亡,而且细胞经过固定后无法对活细胞和死细胞进行区分。Hoechst 33342可以穿透细胞膜,进入正常细胞和凋亡细胞与DNA结合,能在紫外线下显示蓝色荧光,而且染色后凋亡细胞荧光会比正常细胞明显增强。PI不能穿透细胞膜,对于具有完整细胞膜的正常细胞或凋亡细胞不能染色。而对于坏死细胞,其细胞膜的完整性丧失,PI可以穿透细胞膜使坏死细胞着色产生红色荧光。

  检测与分析:用流式细胞仪在激发波长400~500nm检测蓝色荧光,在大于630nm 处检测红色荧光,同时检测光散射情况。采用适当分析软件进行细胞DNA含量分析和光散射分析。如果使用荧光显微镜检测,检测前4℃ 1000g 离心3~5min沉淀细胞,用PBS洗涤一次,再涂片观察红色荧光和蓝色荧光。对于贴壁细胞使用荧光显微镜检测,亦可不收集细胞,弃培养液后直接依次按照上述比例加入试剂即可。

  双染后,可在流式细胞仪上将正常细胞、凋亡细胞和坏死细胞区别开来。在二元直方图上,正常细胞对Hoechst 33342具有拒染性,呈弱蓝色荧光+弱红色荧光(Hoechst 33342+/PI+);凋亡细胞对Hoechst 33342具有嗜染性呈强蓝色荧光+弱红色荧光(Hoechst 33342++/PI+);坏死细胞对PI具有嗜染性,呈弱蓝色荧光+强红色荧光。本试剂盒亦可用荧光显微镜进行观察,检测细胞含量范围一般为0.1~1×106之间。

  染色凋亡试剂盒试验注意事项:

  1、荧光染料都存在淬灭的问题,建议染色后尽快检测。

  2、在为了获得细胞沉淀的离心的过程中,对于特殊细胞,如果细胞沉淀不充分,可以适当提高离心力或延长离心时间。

  3、Hoechst 33342与细胞孵育的时间不宜过长,一般控制在20 min以内。太长容易引起Hoechst 33342的发射光谱由蓝光向红光迁移,导致红色荧光与兰色荧光的比例改变。

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