T24人膀胱移行细胞癌细胞T24培养

二、收货处理方式（T25瓶/冻存管）

【T25】

①快递保存温度：室温

②初步平衡：T25瓶表面消毒后，放37度培养箱平衡复温2h以上

③处理方式：吸走大部分培养基，留10-12ml培养基，拍照并观察细胞。密度80%以上即可吸走培养基消化传代，若密度低于80%可以留10-12 ml继续培养至细胞密度80%以上

④接种方式：T25传代第①次建议1:2传代，即瓶T25传成两瓶

⑤注意事项：若细胞出现漂浮，T25瓶不开封，放至37度培养箱过夜，若细胞贴壁即说明活性正常，按正常操作消化传代即可；若未贴壁，收集细胞培养基离心后，将细胞重悬接种到新的培养瓶中，同时原瓶还贴壁的细胞加培养基继续培养
发货T25瓶装满大约有75ml培养基，可以收集起来，1500rpm离心5min后，取上清4度保存，用于培养细胞，以平稳过渡到客户自己的培养基

【冻存管】

①快递保存温度：液氮长期保存或-80度3天以内

②初步平衡：无须平衡，直接放入-80冰箱或者液氮罐保存

③处理方式：37度水浴摇晃尽快融化细胞，直接在冻存管内将细胞离心。离心转速以离心力150g(约900rpm)左右，1min为宜，弃上清，沉淀用新鲜培养基重悬后接种到10cm培养皿，显微镜下观察细胞并拍照，24h后换液一次

④接种方式：一管细胞建议接种到10cm培养皿或者T25瓶

⑤注意事项：收货时若发现干冰化完，检查冻存管是否融化，若已融化需直接离心细胞接种观察，若未融化可以将细胞按正常步骤保存，以上情况及时反馈
干冰发货的细胞只能在-80保存3天左右，长时间保存会出现活性下降。干冰发货均为两支，客户先复苏一支，若复苏失败及时联系我方并在我方指导下复苏第二支。若客户同时复苏两支均状态不佳，我方将不提供免费售后服务

特殊情况：

1.若培养瓶或者冻存管出现破碎或漏液情况，及时拍照联系销售反馈，按指导进行进一步处理。若只是外包装破损一般不影响培养瓶和冻存管，请放心使用。

2.若无法观察到细胞，建议收集细胞培养基，1200rpm离心5min，观察细胞沉淀量，并用少量培养基重悬沉淀后，取部分悬液放到计数板或者载玻片上观察细胞。

3.部分细胞增殖较快，发货细胞量较多时，培养基可能出现颜色变黄现象。继续培养使用此类培养基时，需要及时观察培养基颜色变化，缩短培养基换液周期，并每瓶多加2-3ml培养基。

4.收货当天不处理细胞时，T25瓶可以消毒拆封口膜后不拧开瓶盖放37度培养箱静置过夜，但不建议超过24h；冻存管可以直接放液氮长期保存或-80度3天以内，必须一周内复苏一只培养检查，否则将超过一周售后期。