SKoV-3细胞培养人卵巢癌细胞

SKoV-3细胞培养人卵巢癌细胞

SKoV-3细胞培养人卵巢癌细胞

-----尚恩生物 186278592O3-----

培养环境：air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%

细胞培养操作

换液周期：2-3天

培养基体积：T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml

传代比例：1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定）

传代方法：

1.尽量吸干净T25瓶原培养基；

2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS；

3.T25瓶加1ml左右胰M，轻轻晃动培养瓶以使胰M铺匀瓶底细胞层；

4.将培养瓶放入37度培养箱消化；

5.消化到细胞间隙变大，但未*脱落时加2-3ml*培养基终止胰M消化；

6.混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清；

7.加新的*培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里；

8.补足*培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养；

注意事项 不同品牌胰M消化时间差别较大，注意严格控制消化时间

消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免影响细胞状态。

三、细胞冻存操作

冻存液配方：92%FBS+8%DMSO(新手建议)或92%*培养基+8%DMSO(高手建议);

冻存规格：200-300万/ml，1ml每管

冻存方法：

1.消化并离心获得细胞沉淀后，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞；

2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管；

3.将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存

注意事项 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案

细胞培养说明

1. 细胞培养需要充足经验，新手或者没有类似细胞培养经验的人建议在专业人士指导下进行操作，尤其注意无菌操作、贴壁细胞消化时间及细胞培养密度。

2. 部分细胞在传代后时，会有以下现象：细胞内会有黑色小点、细胞间隙有些颗粒物、培养基漂浮一些死细胞。以上都是细胞培养常见现象，不影响细胞增殖和实验。

3. 细胞内的黑色颗粒是细胞外分泌泡、细胞器折光或者细胞膜表面物质，这个属于细胞自身特性，无法清除也无法改变，具体情况可以参考ATCC、DSMZ等大型细胞库细胞照片。细胞外的黑色颗粒大部分是细胞碎片，可以吸走培养基后用PBS润洗；润洗不能清除的可以消化细胞重新接种，消化完成后加*培养基终止消化，混匀细胞，收集细胞悬液900-1000rpm(约150g)离心3min，弃上清。再加5ml PBS重悬细胞，再离心后，用*培养基重悬接种到新的培养皿。第二次PBS重悬是为了去除碎片，如果平时碎片比较少，传代时可以省略PBS重悬的步骤；如果碎片很多，建议PBS多洗几次。

4. 不同品牌胰M溶液成分不一样，消化活性差别比较大，更换胰M品牌时需重新摸索消化时间，以消化到细胞间隙变大但未漂浮为准，此时结束消化最佳，避免消化过度导致细胞死亡。细胞消化后比较脆弱，吹打力度不要过大，不要产生过多气泡，否则会严重影响细胞状态。

5. 不同细胞生长速度差异较大，所有细胞收货后第①次传代建议按1:2传代。正常培养时生长较慢、密度较低的细胞需要传代时按1:2传代，生长较快、密度较高的细胞可以按1:4传代。

6. 细胞生长偏慢时，可以将血清浓度增加到15-20%培养一段时间，待细胞状态和生长速度恢复正常后换回10%血清

相关培养基均有售：

DMEM高糖

DMEM低糖

1640基础培养基

1640*培养基

FK12

IMEM

L15

McCoy's 5A

优级胎牛血清

特级胎牛血清

新生牛血清

等...