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贴壁细胞培养时突然飘了很多怎么办?

更新时间:2024-03-25浏览:154次

同学们有没有遇到这种情况:辛辛苦苦培养了一批贴壁细胞,正准备美美地做实验,有一天突然发现细胞变少了!细胞并不是消失了,而是在培养液中大量漂浮着,像一群失去了方向的气球。你不知道该怎么办,只能无奈地看着细胞越养越少。别担心,小尚会告诉你原因和解决方法,建议速速放入收藏夹以备不时之需!

首先,同学们需要了解,细胞漂浮是一个很常见的现象,细胞培养时有部分漂浮但细胞仍然正常生长,这种情况无需特殊处理。特别是呈岛状生长的细胞,漂浮细胞看起来会比较多,保持2-3天换液一次即可,换液的同时漂浮细胞顺便也被清除了。

但如果细胞突然大量漂浮,贴壁的部分明显减少,细胞不再生长,则需要按照下面的内容排查原因并正确处理。

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看起来漂浮细胞较多,但贴壁细胞正常生长,并没有受到影响,正常培养即可

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细胞大量异常漂浮,贴壁细胞状态不佳,需排查原因

1. 温度影响

细胞不能着凉哦!贴壁比较弱的细胞如果遇到了冷的环境,会皱缩甚至脱落,换液等操作之前必须将培养基、PBS等试剂置于37度充分预热。细胞不能靠近冰冷的物品,不要将刚从冰箱拿出的物品放在细胞旁边。冬季尤其需要注意,未开空调的细胞房气温较低,细胞拿出培养箱观察的时间不能太长,否则长时间在低温环境下细胞也容易皱缩脱落。尽量控制观察次数,不要太频繁。

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2. 传代操作的影响

若消化操作不当,细胞极易受损,最终死亡漂浮。细胞在传代消化的时候应该注意中和的时机。一般消化时每隔30s-1min拿出观察,直到部分细胞能自然脱落时再终止消化。避免消化不C底,强行将细胞吹下造成损伤,同时也避免消过度造成损伤。中和吹打时注意枪头不要与细胞层接触,离心重悬时吹打次数不宜过多,力度要轻柔,吹打时可留少许液体在枪头内,避免产生气泡。

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终止消化的时机


(重悬吹打教学视频)

3. 培养基与血清的影响

若培养基、血清等培养试剂开封时间较长,培养箱CO2供气异常等情况,可能导致培养基pH值、渗透压异常、细胞因子降解等种种问题,从而导致细胞漂浮。

建议培养试剂开封后正确分装储存,并尽快使用。

血清对细胞贴壁起着至关重要的影响,血清不合适也可能导致细胞过多漂浮,此时应尝试不同品牌的血清,选择出最合适的血清进行细胞培养。

CO2细胞培养箱定期维护,保证细胞生长环境稳定。

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4. 细胞密度影响

细胞密度过低或过高都可能影响细胞贴壁,过低时细胞生长减慢甚至无法生长最终漂浮;细胞长满后未及时传代,长时间高密度培养,细胞将会受损漂浮。因此要注意接种密度不要过低,密度至80%及时传代。

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密度过低

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密度过高

5. 培养器皿的影响

一般来说,培养贴壁细胞需要使用表面处理过的器皿。所谓表面处理,就是通过特定的方法使器皿底部具有亲水性,有效提高细胞的贴壁性,大家购买培养器皿的时候需要多多留心。如果细胞贴壁太弱了,一碰就脱落,可以尝试用多聚赖氨酸、胶原蛋白等物质包被培养器皿,以增加细胞贴壁牢固度。

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总之,如果发现细胞大量异常漂浮,排查原因并尽快处理通常可以解决。

希望这篇文章对你有所帮助!



 

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