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细胞攻略 | OCI-LY3 (人弥漫大B细胞淋巴瘤细胞)培养教程

更新时间:2024-03-25浏览:289次

--细 胞 基 本 信 息---

细胞名称 OCI-LY3(人弥漫大B细胞淋巴瘤细胞)

细胞别称 OCI-LY3; OCI-ly3; OCI-LY-3; Oci-Ly-3; OCI-Ly 3; OCILY-3; OCI-Ly03; OCI Ly3; OCILY3; Ly3; LY3

细胞货号 SNL-226

生长特性 悬浮

培养条件 1640+20% FBS+1% P/S

培养环境 空气,95%; 二氧化碳 (CO2),5%;37

细胞简介 OCI-LY3细胞于1983年从一名复发时患有B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL,弥漫性大B细胞淋巴瘤,DLBCL,4B期)的52岁男性骨髓样本中建立,是一种激活型的B淋巴细胞。OCI-LY3细胞在文献中描述为EBV阴性,缺乏典型的t(8;14)易位。OCI-LY3细胞HBV、HCV、HIV-1、HIV-2、MLV均呈阴性。


细胞正常生长形态照片

 


 

OCI-LY3细胞培养注意事项

OCI-LY3细胞大部分聚集成葡萄串状悬浮生长,细胞团较大时需要吹打成小团,防止团块中间的细胞因营养不足而死亡,小团块无需处理。除非实验需要,不建议将细胞吹散成单个细胞。

OCI-LY3细胞对血清要求高,应该使用优质血清进行培养,血清比例为20%

随着培养时间增加,会有部分细胞贴壁伸展的情况,传代时可以轻轻吹打细胞贴壁面,吹下的细胞可以正常传代,未吹下的细胞无需收集。

该细胞培养过程存在密度依赖的情况,细胞密度建议维持在1E5-5E5/ml之间,密度过低或者过高可能会影响细胞状态;

 

 

OCI-LY3细胞换液方法

 

半换液法:

1. 准备所需的培养基、离心管以及无菌枪头等;(培养基提前预热)

2. 将培养瓶静置5-10min,待细胞沉底;(肉眼观察细胞沉底情况)

3. 吸头紧贴液体表面,小心吸出一半的培养基,转移到离心管;

4. 900-1000rpm 3min离心,离心管里若有细胞,则用新鲜培养基重悬后放回原瓶;

5. 原瓶补充一半的新鲜培养基。

 

离心换液法:

1. 准备所需的培养基、离心管以及无菌枪头等;(培养基提前预热)

2. 将所有细胞悬液转移至离心管中;

3. 900-1000rpm,3min离心;

4. 培养瓶中加入适量新鲜培养基;

5. 离心完成后弃上清,加适量新鲜培养基轻轻重悬细胞沉淀,将细胞悬液接种回培养瓶中,混匀细胞,放入培养箱中继续培养

 

 

OCI-LY3细胞传代方法

离心法:

1. 准备所需的培养基、离心管以及无菌枪头等;(培养基提前预热)

2. 用移液器吸取培养瓶内细胞悬液转移至离心管中;

3. 900-1000rpm,3min离心收集细胞;

4. 在培养瓶中加入适量新鲜培养基;(T25推荐10mL,T75推荐20mL)

5. 离心完成后,弃离心管内上清,然后加入适量新鲜培养基,轻轻重悬吹散细胞,将细胞悬液均匀接种至若干个新的培养瓶中,轻轻混匀后将细胞放入培养箱中继续培养。

 

直接分瓶法:

1. 轻轻将细胞吹散成小团并混匀。

2. 用移液器吸取培养瓶内细胞悬液,均分到若干个新培养瓶中,每瓶再补充适量的新鲜培养基,轻轻混匀后将细胞放入培养箱中继续培养。

Tips:

注意控制吹打力度尽可能轻柔,吹打次数不要过多,避免细胞受机械损伤

传代比例推荐1:2

 

OCI-LY3细胞冻存方法

1. 准备所需的培养基、PBS、血清、DMSO、离心管以及无菌枪头等;(试剂需提前预热)

Tips:若冻存前培养基已经变黄,先换液静置培养4h左右,待细胞活力稳定后再进行冻存。

2. 根据收集到细胞量,配制相应量的冻存液,并准备相应数量的冻存管,在冻存管上标志细胞名称,代次,冻存时间等信息。推荐冻存液配方:92%FBS+8%DMSO或92%完*培养基+8%DMSO;冻存密度300万细胞/mL/管。

Tips:冻存密度过低将导致复苏后状态不佳。

3. 将细胞悬液转移至离心管中1000rpm,3min离心收集细胞;

4. 离心完成后弃上清,加入相应量的配置好的冻存液轻轻重悬混匀细胞,将细胞悬液分装至冻存管中。注意吹打力度,不要产生过多气泡;

Tips:加入冻存液混匀细胞后及时分装并将细胞降温冻存,以减少DMSO对细胞的毒性。

5. 将细胞放置程序降温冻存盒中,再将冻存盒转移至-80℃冰箱进行降温冻存。

6. 次日(16h-24h后)复苏一管检查冻存效果,确认没问题后及时将冻存细胞放置液氮中保存,细胞在-80℃冰箱放置时间不要超过3天。

 

OCI-LY3细胞复苏方法

1. 提前将水浴锅预热至37℃,培养基复温至室温或37,离心机设置好转速;

2. 将冻存细胞从液氮或-80℃冰箱中取出,迅速置于37℃水浴,快速摇晃至完*融化,融化时间不超过2min;

Tips:

若液氮或冰箱距离细胞房较远,细胞需要放在干冰或冰盒上运送至细胞房。

水浴时使用一次性PE手套包住冻存管避免直接接触水源,避免污染。

3. 直接将冻存管900-1000rpm 2min离心,同时在培养瓶中加入适量新鲜培养基;

4. 离心完成后弃上清,吸取1mL新鲜培养基(建议血清浓度提高至20%)轻轻重悬细胞,吹散细胞后接种到培养瓶中;

5. 使用十字法或8字法将细胞混匀后置于培养箱中培养

Tips:整个细胞复苏过程在尽可能5-10min内完成。

 

OCI-LY3细胞收货攻略

1. 拆封包装盒,确认细胞,说明书等是否齐全,收货细胞名与所购买细胞是否符合;

2. 观察细胞培养瓶是否完好,有无漏液,培养瓶内培养基是否有肉眼可见的絮状物或者浑浊等,发现异常及时拍照联系销售人员;

3. 确认无异常后,将培养瓶表面消毒,然后撕掉封口膜竖立放入培养箱平衡4h左右,让悬浮细胞沉下培养瓶底部;

4. 平衡过程中可以仔细阅读细胞说明书,知悉细胞所需培养体系,培养环境以及培养注意事项等;

5. 平衡完成后竖立取出细胞培养瓶,此时大部分细胞沉在培养瓶底部,小心吸取上清至离心管中,保留10mL左右培养基在培养瓶内,小心操作,尽量不要吸到沉在底部的细胞;

6. 将离心管1200rpm,5min离心收集未沉下培养瓶底部的细胞,上清可以4℃保存,后续用于培养细胞,以平稳过度到自己的培养基。将收集到的细胞接种至原培养瓶;

7. 观察细胞,根据细胞状态,以及团块数量、大小决定传代或继续培养。

 

常见问题及解决方案

培养过程中细胞碎片较多怎么处理?

1. 细胞内的黑色颗粒是细胞外分泌泡及细胞器折光,这个属于细胞自身特性,无法清除也无法改变,大部分细胞都会有这种现象,只是不同细胞颗粒多少有区别,细胞培养体系不适应、营养缺乏、渗透压异常等均可能导致细胞内颗粒增加,建议使用合适的培养条件。

2. 细胞外的黑色颗粒大部分是细胞碎片和细胞代谢产物,可通过800rpm,3min低速离心以去除部分碎片。少量碎片不影响细胞生长,不建议频繁离心。

 

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