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人乳腺癌细胞MCF-7的复苏实验流程

发布时间:2021/4/8   点击次数:112
 
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人乳腺癌细胞MCF-7保留了多个分化了的乳腺上皮的特性,包括:能通过胞质雌激素受体加工雌二醇并能形成圆形复合物。MCF7 [MCF-7]细胞含有Tx-4癌基因;肿瘤坏死因子c可以抑制MCF7 [MCF-7]细胞的生长,抗雌激素处理MCF7[MCF-7]细胞能调变IGFBP'S的分泌。

1.实验目的
恢复冻存的细胞的活性。
2.实验原理
在实际操作中,冻存细胞要进行复苏,再培养传代。复苏细胞一般采用快速融化法。以保证细胞外结晶快速融化,以避免慢速融化水分渗入细胞内,再次形成胞内结晶损伤细胞。
3.实验材料
①仪器:CO2培养箱、倒置显微镜、超净台、离心机、37℃水浴锅。
②材料:于液氮中保存的人乳腺癌细胞MCF-7细胞冻存管、培养瓶、离心管、移液管,巴斯德吸管、废液缸、75%酒精棉球、酒精灯、记号笔、镊子、灭菌细胞培养瓶。
③试剂:RPMI1640完全培养基。
4.操作步骤
(1)实验前准备
①将水浴锅预热至37℃,将培养液预热后分装到培养皿中。
②离心管、吸管、培养瓶等。
(2)取出冻存管
①根据细胞冻存记录按标签找到所需细胞的编号。
②从液氮罐中取出细胞盒,取出所需的细胞,同时核对管外的编号。
(3)迅速解冻
①迅速将冻存管投入已经预热的水浴锅中迅速解冻,并要不断地摇动,使管中的液体迅速融化。
②1~2 min后冻存管内液体完全溶解,取出用酒精棉球擦拭冻存管的外壁,再拿入超净台内。
(4)制备细胞悬液
①将复苏细胞直接转入已添加培养基的培养瓶内,置于37℃,5%CO2培养箱中继续培养(培养瓶盖没有透气孔的话,瓶盖不要拧太紧)。
②第2天(在细胞贴壁生长24 h前),用新鲜的培养基给细胞换液后继续培养。
我们推荐使用尚恩生物MCF7 [MCF-7](人乳腺癌细胞)完全培养基(产品货号:SNLM-060)作为体外培养MCF7 [MCF-7](人乳腺癌细胞)的培养基。

 
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