您的位置: 首页 > 新闻动态 > 小鼠原代细胞分离实验步骤

小鼠原代细胞分离实验步骤

发布时间:2021-07-16浏览:148次

  小鼠原代细胞是从小鼠的特定组织中提取出来的,则可直接得到目的基因不表达的原代细胞模型,且与我们在KO小鼠上的研究具有更好的承接性,从而让我们想要证实的实验目的更具有说服性。KO小鼠的原代细胞还可用于细胞水平的药物筛选、药物评价等方面。原代细胞(Primary cells)是指来源活体组织,经特定分离方法制备而成的初始细胞。原代细胞离体时间短且不经过永生化过程,其生物学特性未发生很大变化,仍保持原有的遗传特征,可更好地反映细胞在体内的生长状态,从而获得与体内生理功能更接近的数据。
  小鼠原代细胞分离实验步骤:
  1、小鼠麻醉
  根据体重计算相应的麻醉剂量并腹腔注射(也可以用异氟烷进行空气麻醉)
  2、对完全麻醉后的小鼠进行解剖,打开腹腔,找到小鼠下腔静脉及门静脉,使用滞留针插入下腔静脉,将50-60ml的缓冲溶液一在10-20min内缓慢注射进入小鼠血液循环内,看到小鼠肝脏有明显肿胀时剪开门静脉,完成后改用缓冲溶液二进行冲洗。
  3、冲洗完成后,将小鼠肝脏剪下,转移至DMEM高糖培养基,用DMEM培养基清洗2-3次后,使用灭菌镊子将肝脏在培养基内撕开,使原代肝细胞从肝脏内流出。
  4、将分离得到的肝脏细胞过筛网筛选,过滤组织碎块及其他杂质,并对细胞混悬液离心,按照一定的离心力得到初步的肝细胞沉淀,此时的肝细胞中混杂着肝脏实质细胞和非实质细胞,需要使用percoll离心液进行梯度离心。
  5、梯度离心后的细胞即为原代肝脏实质细胞,重悬后计数即可用于后续的实验,若对细胞纯度存疑,也可以进行流式测定。

 

联系我们
  • QQ:1907801191 953399590
  • 邮箱:1783927101@qq.com
  • 传真:+86-027-87800889
  • 地址:武汉市东湖高新区高新大道666号光谷生物城创新园C6栋

扫一扫,关注公众号

©2021 武汉尚恩生物技术有限公司 版权所有    备案号:鄂ICP备2020018368号-2    技术支持:化工仪器网    Sitemap.xml    总访问量:16428    管理登陆