人支气管成纤维细胞

　　支气管表现为成纤维细胞增殖、重排、细胞外基质堆积，管壁增厚、管腔狭窄；而肺组织表现为肺泡壁结构断裂、破坏、没有明显的纤维化，呈现肺气肿改变。成纤维细胞是组织损伤修复过程中的活跃细胞，不但作为结构细胞起支持作用，还能够通过分泌细胞外基质和基质金属蛋白酶等参与组织重构过程。由此推测，支气管和肺成纤维细胞在损伤修复过程中可能表现出不同的生物学特性，从而在慢性阻塞性肺病气道炎症过程中，支气管和肺组织呈现出不同的重构特点。本研究在体外培养的人肺和支气管成纤维细胞上，研究波形蛋白和肌动蛋白的表达以及二者增殖特性的差别，以助阐明慢性阻塞性肺病支气管和肺组织重构的发生机制。

　　人支气管成纤维细胞培养方法：

　　1.体外培养人支气管上皮细胞株，人胚肺成纤维细胞株，并建立人支气管上皮细胞与人胚肺成纤维细胞共培养体系。

　　2.BRS-3激活、O3应激支气管上皮细胞后与肺成纤维细胞共培养，用MTT比色法检测肺成纤维细胞及支气管上皮细胞的增殖活性，羟脯氨酸试剂盒检测成纤维细胞胶原合成的状况。

　　3.为初步探讨支气管上皮细胞共培养对成纤维细胞的作用介质，收集支气管上皮细胞培养上清液，ELISA法及放射免疫分析法检测TGF-β1、TNF-4、PGE2含量，并观察其时间变化以及其含量与成纤维细胞活动的关系。

　　4.为证实共培养效应的重要介质为TGF-β1，TGF-B1反义寡核甘酸（ASO）设计，脂质体转染，MTT法检测TGF-β1ASO转染的支气管上皮细胞对成纤维细胞的增殖活性。

　　5.为观察支气管上皮细胞TGF-β1表达是否受与成纤维细胞共培养的影响，用免疫组织化学法检测单独培养的HBECs与共培养的HBECS TGF-B1表达差异，并进行定量分析。

　　人支气管成纤维细胞结果：

　　1.在正常共培养条件下支气管上皮细胞与成纤维细胞的增殖活性相互受到抑制，BRS-3激活、O3应激条件下支气管上皮细胞对肺成纤维细胞增殖与胶原合成的作用由抑制转变为促进。

　　2.在BRS-3激活、O3应激条件下支气管上皮细胞培养上清液中TGF-β1含量高于对照组，并与成纤维细胞的增殖与胶原合成呈显著正相关。TNF-a分泌量极少，且与成纤维细胞的增殖与胶原合成相关性不大。PGE2随时间延长分泌量减少，并与成纤维细胞的增殖与胶原合成呈显著负相关。两种处理组TGF-β1、TNF-a、PGE2分泌随时间延长趋势各有其特点。

　　3.TGF-β1ASO转染HBECs并激活BRS-3后，其对共培养的成纤维细胞的促增殖活性明显减弱（P<0.01）。

　　4.相同预处理条件下，HBECs单独培养或共培养时TGF-β1表达差异无显著性（P>0.05），说明成纤维细胞对支气管上皮细胞的TGFβ1表达无明显反作用。HBECs单独培养时O，应激明显促进TGF-β1表达（P<0.05）；而在共培养条件下用P3513激活BRS-3、O3应激均可使TGF-β1表达增多（P<0.05）。

　　人支气管成纤维细胞结论：

　　1.在正常条件下支气管上皮细胞与肺成纤维细胞的增殖活性相互抑制，O3应激及BRS-3激活可使上皮细胞对成纤维细胞增殖及胶原合成的抑制作用转化为促进作用。

　　2.O3应激及BRS-3激活的支气管上皮细胞TGF-β1分泌增多、PGE2合成减少，是引起成纤维细胞增殖活动和胶原合成的重要细胞因子。