293细胞*培养基

293细胞是腺病毒载体的包装细胞。腺病毒是继逆转录病毒后用于基因治疗研究的热门载体。直接将腺病毒载体导入人体内表达目的基因，治疗恶性肿瘤、心血管疾病或一些遗传疾病已取得可喜进展；利用腺病毒载体在包装细胞293中表达分泌性蛋白质，如蛋白酪氨*激酶1C等亦成为生产重组蛋白的一条途径。因此完善293细胞的大规模培养技术具有越来越重要的市场意义。哺乳细胞的大规模培养方式有三种：贴壁培养、微载体培养、无血清悬浮培养。这三种方式均可用于293细胞的大规模培养。

转瓶培养一般用于小量培养到大规模培养的过渡阶段，或作为生物反应器接种细胞准备的一条途径。与传统静止单层培养相比，转瓶具有三大优点：为细胞提供较大的生长表面；轻微的转动可以防止培养液中形成的某些成分对细胞生长可能产生的影响：细胞大部分时间仅覆盖一薄层培养液，有利于气体交换。我们已成功实现293细胞的转瓶培养。由于293细胞对生长环境的改变较为敏感，细胞容易成团，因此维持稳定的温度、酸碱度和转动速度对细胞正常均匀生长至关重要。

胚肾细胞系293是一种E1区缺陷互.补细胞系。用磷酸钙共转染法很容易使DNA进入细胞。悬浮的293细胞很容易大规模培养，但不容易长期保持稳定，应用时最好采用单层培养。

传达次数较少的单层培养293细胞是成功获得重组病毒和病毒斑的关键。293细胞的培养质量特别是单层培养的品质情况是病毒斑形成的重要因素。也是重组子构建成功与否的关键。293细胞在传代120次以后，其生长状况不再*是单层的了，偶尔会形成局部的细胞成团聚集，一旦出现这种情况很能形成病毒斑。应立即抛弃，重新引入新传代的细胞。单层培养细胞在5一10%FBSDMEM中能生长很好。一般来讲，1：10传代后，一周可以长满。严禁过度生长，这点很重要。因为会导致细胞密度加大和堆积，影响病毒斑的形成和转染。