染色凋亡试剂盒贴壁细胞的处理方法

　　染色凋亡试剂盒（Hoechst 33342/PI Apoptotis Assay Kit）是一种采用Hoechst33342和碘化丙啶（Propidium lodide，PI）双荧光染色方法进行细胞周期与细胞坏死分析的检测试剂盒。单纯的PI染色能够观察DNA直方图上凋亡细胞的亚G1峰，但只能代表G0/G1期发生凋亡，无法观察S期和G2期发生的细胞凋亡。而且，细胞经过固定后无法对活细胞和死细胞进行区分。可以穿透细胞膜，进入正常细胞和凋亡细胞，与DNA结合，能在紫外线下显示蓝色荧光，而且染色后凋亡细胞荧光会比正常细胞明显增强。

　　细胞凋亡是生物界重要的生命现象之一。从线虫至高等的哺乳类动物，从胚胎至成人，从生理到病理，从生到死的整个过程，体内不同的细胞多具有这类死亡方式。自100多年前Carl Vogt 发现这种死亡方式到1972年Kerr等人研究并命名这种死亡为凋亡（apoptosis），其后大量有关凋亡的研究不断深入，人们对此也不断产生新的认识：凋亡是由基因编程调控的细胞自主过程，也是机体维持自身稳定的一种基本生理机制，是有许多基因产物及细胞因子参与的一种有序的细胞自我消亡形式。调亡过程一般可分为三个阶段：诱导期、效应期和降解期。

　　染色凋亡试剂盒贴壁细胞处理方法：

　　1、取洁净盖玻片在70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间，无菌超净台内吹干或用无菌的PBS 或生理盐水洗涤3次，再用细胞培养液洗涤1次。

　　2、加入干预条件使细胞发生凋亡后，吸尽培养液，加入Hoechst 固定液0.5ml。

　　3、去除固定液，用PBS或生理盐水洗，吸尽液体。洗涤时宜用摇床，或手动晃动。

　　4、加入Hoechst 33258染色液0.5ml孵育。也宜用摇床，或手动晃动数次。

　　5、弃染色液，用PBS或生理盐水洗，吸尽液体。洗涤时宜用摇床，或手动晃动。

　　6、滴一滴抗荧封片剂于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，让细胞接触封片剂，尽量避免气泡。

　　7、荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。激发波长350nm左右，发射波长460nm左右。